牛布氏杆菌酶联免疫分析！


一、通用名：牛布氏杆菌酶联免疫分析试剂盒
二、使用目的：本试剂盒用于测定牛血清、血浆、或其它组织液中布氏杆菌的含量。
三、实验原理
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛布氏杆菌水平。用纯化的布氏杆菌抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入布氏杆菌，再与HRP标记的布氏杆菌抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的布氏杆菌呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中牛布氏杆菌浓度。
四、试剂盒组成
⒈20倍浓缩洗涤液 30ml1瓶 7 终止液 6ml1瓶
⒉酶标试剂 6ml1瓶 8 标准品（270ng/L） 0.5ml1瓶
⒊酶标包被板 12孔8条 9 标准品稀释液 1.5ml1瓶
⒋样品稀释液 6ml1瓶 10 说明书 1份
⒌显色剂A液 6ml1瓶 11 封板膜 2张
⒍显色剂B液 6ml1/瓶 12 密封袋 1个
五、标本要求
⒈标本采集后尽早进行实验。血清、血浆可以直接检测
⒉组织：按相关文献提取后，取上清液待测
⒊不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
⒋可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
六、操作步骤
⒈标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别加标准品100l，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50l，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100l分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50l，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50l弃掉，再各取50l分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50l分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50l，混匀后从第七、第八孔中分别取50l加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50l，混匀后从第九第十孔中各取50l弃掉。（稀释后各孔加样量都为50l，浓度分别为（180 ng/L ，120 ng/L， 60 ng/L，30 ng/L， 15 ng/L）。
⒉加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40l，然后再加待测样品10l（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
⒊温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
⒋配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用
⒌洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
⒍加酶：每孔加入酶标试剂50l，空白孔除外。
⒎温育：操作同3。
⒏洗涤：操作同5。
⒐显色：每孔先加入显色剂A50l，再加入显色剂B50l，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
⒑终止：每孔加终止液50l，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
⒒测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
七、计算
以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
八、注意事项
⒈试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。
⒉浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。
⒊各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。
⒋请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计算时请最后乘以总稀释倍数（n5）。
⒌严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准
⒍底物请避光保存。
⒎封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
⒏所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
⒐本试剂不同批号组分不得混用。
⒑如与英文说明书有异，以英文说明书为准。
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